中草药双黄连口服液抗病毒效果研究

畜牧与饲料科学　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｆｅｅｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　中草药双黄连口服液抗病毒效果研究　李京玉　，李玉香　，宋爱军　，韩　敏。，李凤华’　（１．内蒙古农牧业科学院动物医学研究所，内蒙古　呼和浩特０１００３０；２．河北沧州ｍ入境检验检疫局，河北　沧　州０６１０００；３．内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古　呼和浩特０１００１８）　摘要：采用中草药合剂“双黄连口服液”对新城疫病毒进行抑杀效果试验，结果表明，对鸡使用双　黄连口服液安全性高，且对新城疫的最低抑杀浓度为０．００５　ｍｇ／ｍＬ。说明“双黄连Ｉ３＇服液”对非典　型性新城疫病毒有明显的抑杀作用。　关键词：中草药合剂；安全性；新城疫病毒；抑杀试验　’　中图分类号：Ｒ２８５．６　文献标识码：Ａ　文章顺序编号：１６７２—５１９０（２００８）０６—００１０—０２　近年来，随着人们对禽病认识的加深．免疫程　该实验室制备。　序不断严密，致使典型性新城疫的发病率逐年降　１．２试验方法　低，几乎完全消失，而非典型性新城疫却屡见不　１．２．１安全性试验　鲜。该病的病原、发病机制、诊断、治疗及免疫均与　将以上雏鸡随机分成２组，１０只／组．第１组　典型性新城疫一致，但流行特点、临床症状及病理　以２０　ｍＬ／Ｌ双黄连口服液混饮，连用３　ｄ：第２组以　变化却与典型性新城疫不同。发病率和死亡率均　同等饲养条件饲养，但不给药作为对照，观察１　较典型新城疫低，每天死亡率为ｌ％～１Ｏ％．　有　周。１周后将其全部剖杀，观察内脏有无异常变化，　的鸡只发病后间隔几天才　广，病禽症状轻，剖检　并互相比较，确定中药提取液毒性的大小。　病理变化不明显。临床上雏鸡主要表现为聚堆，精　１．２．２病毒抑杀试验　神沉郁，拒食，羽毛松乱，呼吸闲难。成年鸡发病　将双黄连口服液用生理盐水做ｌ：１００、１：１５０、　时，呈现减食或拒食，产蛋鸡精神不振．排绿色稀　１：２００倍稀释，备用　便，产蛋率减少１０％～３０％，小型蛋、软壳蛋明显　将孵化至１０日龄的８０枚ＳＰＦ鸡胚随机分为　增多，部分鸡呈现神经症状，尤其在采食或受惊时　６组，每组１０枚。同时将ＮＤＶ强毒用ＰＢＳ进行　更为明显，每日有零星病鸡死亡。疫情可持续较长　１００倍稀释，并加青、链霉素各１　０００　ＩＵ／ｍＬ，４　ｃｃ作　时间，给养禽生产带来很大损失。　用１　ｈ，待用（简称病毒液）。第１组为ＮＤＶ强毒　双黄连口服液是由黄芩、金银花、连翘等中药　组，将稀释好的病毒液与ＰＢＳ等体积混合，经绒毛　的提取物配合制成的，具有清瘟解毒、散热消炎的　尿囊膜（ＣＡＭ）接种鸡胚，每胚０．２　ｍＬ。第２组为　功效。为了探讨双黄连口服液的安全性及其对新　ＮＤＶ标准阳性血清中和组，每０．５　ｍＬ病毒液加入　城疫病毒的抑杀作用，笔者进行了该项研究。　０．００５　ｍＬ　ＮＤＶ标准阳性血清和０．４９５　ｍＬ　ＰＢＳ．４℃　１材料与方法　作用１　ｈ，后经ＣＡＭ接种鸡胚，每胚０．２　ｍＬ。第３　１．１试验材料　组、第４组、第５组分别为不同稀释度的双黄连口　试验动物及鸡胚：同批健康７日龄雏鸡２０　服液药液试验组，将双黄连口服液药液分别用生　只，鸡胚（孵化至一定日龄）６０枚，均由内蒙古农牧　理盐水进行１：１００、１：１５０、１：２００倍的稀释，并分别　业科学院种鸡场提供。　与病毒液等体积混合，３７℃作用ｌ　ｈ后，经ＣＡＭ　ＮＤＶ强毒与标准阳性血清：均由中国兽药监　分别接种鸡胚各１０枚，每胚０．２　ｍＬ。第６组为　察所提供。　ＰＢＳ对照组，经ＣＡＭ接种ＰＢＳ，每胚０．２　ｍＬ。然　受试药品：复方中草药合剂双黄连１７Ｉ服液　由　后将所有接种鸡胚在３７．５　条件下孵化，每１２　ｈ　收稿日期：２００８—１０—２９　照蛋１次，并记录鸡胚死亡情况，直至１０８　ｈ试　作者简介：李京玉（１９６５一），女，实验师，主要研究方向为兽　验结束。各试验组接种物中的双黄连口服液含　医预防医学　量见表１　第６期　李京玉：中草药双黄连口服液抗病毒效果研究　ｍＬ　１１　表１　各试验组的双黄连口服液含量　３讨论　安全性试验结果说明，该中药提取液的半数　致死浓度（ＬＯ∞）大于１０　ｍＬ／Ｌ，按急性毒性试验分　级，该方剂属无毒物，是安全可靠的。因此，双黄连　口服液可安全投入临床使用。　在抑杀试验中，选用１０　１３龄ＳＰＦ鸡胚对不同　浓度的双黄连口服液进行ＮＤＶ人工感染抑杀试　验。鸡胚接种后，在０～１０８　ｈ对鸡胚感染及死亡情　况进行观察：第１组强毒组死胚率为９０％，剖检鸡　１．２．３病理变化观察　将死亡的鸡胚立即剖检，观察并记录其病理　变化。试验结束时，未死亡的鸡胚一并剖检，观察　并记录其病理变化。　２结果　２．１　中草药合剂“双黄连口服液”安全性　结果表明，每天以中草药提取液“双黄连口服　液”以２０　ｍ　Ｌ的剂量混饮后，雏鸡未出现任何不　良反应，经剖检未发现内脏有异常变化。　２．２抑杀试验　般认为，在鸡胚接种后２４　ｈ以内死亡者应　与病毒作用无关。结果１—６组的鸡胚死亡率分别　为９０％、０、０、０、１０％、０，双黄连口服液组的鸡胚　死亡率明显低于攻毒对照组，尤其是高浓度双黄　连１５服液组，鸡胚的死亡率为０。结果见表２。　表２　双黄连口服液抑制ＮＤＶ致鸡胚死　亡和剖检鸡胚所发生的病理变化　只．ｈ．％　注：各组肩注字母相同者差异不显著（Ｐ＞０．Ｏ５），不同者　差异显著（尸＜Ｏ．０５）。Ａ：胚胎全身充血，头顶部出血，足趾部　出血，胸、背、翅膀等处有小出血点或出血斑，卵黄囊有出　血，胚膜湿润且稍厚，并有由细胞浸润而形成的蚀斑；Ｂ：胚　胎全身有出血点或出血斑，头顶及足趾部有少量小出血　点；Ｃ：胚胎不具有ＮＤＶ的任何特征症状。　２．３鸡胚的病理变化　剖检鸡胚时，观察到鸡胚所发生的病理变化　结果见表２。其结果显示，死亡鸡胚病变完全与　ＮＤ的特征病变相一致，从而进一步证明，鸡胚死　亡是由ＮＤＶ所致　胚发现胚胎全身充血，头顶部出血，足趾部出血，　胸、背、翅膀等处有小出血点或出血斑，卵黄囊有出　血，胚膜湿润且稍厚，并有由细胞浸润而形成的蚀　斑；第２组ＮＤＶ标准阳性血清中和组、第３组双黄　连口服液１００倍稀释组、第４组双黄连口服液１５０　倍稀释组以及第６组为ＰＢＳ对照组的死胚率均为　０，剖检鸡胚不具有ＮＤＶ的任何特征症状；第５组　双黄连口服液２００倍稀释组死胚率为ｌ０％，剖检　鸡胚发现胚胎全身有出血点或出血斑，头顶及足趾　部有少量小出血点。由此可见双黄连口服液药液作　１００倍、１５０倍、２００倍稀释后，对人工感染ＮＤＶ强　毒的鸡胚保护率分别为１００％、１００％、９０％，比　ＮＤＶ强毒对照组分别提高了８Ｏ％、８０％、７０％。结果　表明．双黄连口服液对ＮＤＶ强毒具有很强的抑杀作用。　该试验为双黄连口服液的临床应用提供了理论依据。　双黄连口服液是一种由纯中药提取物制成的　中草药合剂，其组成方剂中，黄芩、金银花、连翘均　有清热解毒的功效；黄芩有镇静、降压、利尿、降低　毛细血管通透性和抑制流感病毒、伤寒杆菌、痢疾　杆菌的作用：金银花可用于风热感冒，对痢疾杆菌、　大肠杆菌、伤寒杆菌有抑制作用，并有抗流感病毒　的作用。而连翘则可强心利尿，对肺炎双球菌、伤寒　杆菌及流感病毒有抑制作用。总的来讲，双黄连口　服液具有清热解毒、强心利尿的功效，可以清瘟解　毒、散热消炎。不但具有安全性高的特性，而且对病　毒具有很强的抑杀作用，尤其是对ＮＤＶ强毒，其抑　杀效果十分明显。因此，中草药合剂双黄连口服液　在生产实践中可以作为抗病毒药被推广使用。　参考文献：　［１］　卡尔尼克　．禽病学［Ｍ］．苏敬良主译．北京：中国农　业出版社．１９９９：１０．　［２］　中国农业科学院哈尔滨兽医研究所．动物传染病学　［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９９：９．　［３］　中国兽药典委员会．中华人民共和国兽药典［Ｍ］．北　京：化学工业出版社．２０００：１１．　［４］　成都中医学院．微生物学［Ｍ］．四川：人民卫生出版社，　畜牧与饲料科学　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｆｅｅｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　仔鸡外翻肠囊适宜培养时间的研究　徐运杰，方热军，霍振华，蒋小丰　（湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙４１０１２８）　摘要：试验旨在用乳酸脱氢酶法探讨仔鸡肠囊的最佳培养时间。采用单因素试验设计，将６只三　黄公鸡的十二指肠、空肠和回肠肠囊随机分配到锥形瓶中，１只鸡为１个重复．每个肠段６个重　复，然后在０，２０，４０，６０和８０ｍｉｎ用移液枪分别从每个锥形瓶、Ｐ取１００　Ｌ培养液分析乳酸脱　氢酶活力。结果表明，在０～６０　ｍｉｎ．培养液中乳酸脱氢酶活力上升较缓慢，６０　ｍｉｎ后上升幅度较　快：仔鸡肠囊的适合培养时间是４０～５０　ｍｉｎ　关键词：仔鸡；外翻肠囊；活性；乳酸脱氢酶　中图分类号：￥８３１．１　文献标识码：Ａ　文章顺序编号：ｌ６７２—５１９０（２００８）０６—００１２—０３　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｏｐｔｉｍｕｍ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｔｉｍｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｅｖｅｒｔｅｄ　Ｇｕｔ　Ｓａｃｓ　ｉｎ　Ｂｒｏｉｌｅｒｓ　ＸＵ　Ｙｕｎ－ｊｉｅ，ＦＡＮＧ　Ｒｅ—ｉａｎ，Ｈｕｏ　Ｚｈｅｎ—ｈｕａ，ＪＩＡＮＧ　Ｘｉａｏ—ｆｅｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ　４１０１２８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｉｍｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｖｅｎｅｄ　ｇｕｔ　ｓａｃｓ　ｉｎ　ｂｒｏｉｌｅｒｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｕｓｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ　ｄｅｓｉｇｎ，ｔｈｅ　ｄｕｏｄｅｎａｌ，ｊｅｊｕｎｕｍ，ｉｌｅｕｍ，ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｏｆ　６　Ｔｈｒｅｅ－ｙｅｌｌｏｗ　ｃｏｃｋｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｉｎｔｏ　ｃｏｎｉｃａｌ　ｆｌａｓｋ　ｗｉｔｈ　ａ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ａｓ　ａ　ｒｅｐｅａｔ　ａｎｄ　ａ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ａｓ　６　ｒｅｐｅａｔｓ．Ｔｈｅｎ　ａｔ　０，　２０，４０，６０　ａｎｄ　８０　ｍｉｎ，１００　Ｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｃｏｎｉｃａｌ　ｆｌａｓｋ　ｗａｓ　ｔａｋｅｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐｉｐｅｔｔｅ　ｇｕｎ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ｉｎ　ｃｕｈｕｒｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｌｏｗｌｙ　ｆｒｏｍ　０　ｍｉｎ　ｔｏ　６０　ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｓｉｎｇ　ｒａｎｇｅ　ｗａｓ　ｆａｓｔｅｒ　ａｆｔｅｒ　６０　ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｉｍｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｖｅｒｔｅｄ　ｇｕｔ　ｓａｃｓ　ｉｎ　ｂｒｏｉｌｅｒｓ　ｗａｓ　４０～５Ｏ　ｍｉｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｒｏｉｌｅｒｓ；ｅｖｅｎｅｄ　ｇｕｔ　ｓａｃｓ；ａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　外翻肠囊法是在体外培养小肠肠环技术和刷　外被测物质的变化来反映肠道对该物质的吸收状　状缘膜囊技术的基础上发展而来的，是指在动物　况或吸收机理的一种生理学实验技术。该方法因　麻醉无痛或屠宰状态下立即分离小肠．去掉肠系　操作简便、试验条件容易控制、重复性好和经济适　膜，用生理盐水或缓冲液冲洗干净．然后根据试验　用而被广泛应用。影响试验结果的因素很多，其　目的将所需肠段外翻使肠黏膜向外，结扎一端形　中肠囊培养时间的长短对结果有很大影响。不同　成肠囊状．灌注人工培养液后结扎另一端，置于添　研究者对肠囊培养时间的报道各异。计峰等报　加有被测物质的培养液中，通人０　或９５％Ｏ　和　道，鸡小肠肠囊在２０～４０　ｍｉｎ之间对锰的吸收率　５％ＣＯ　的混合气体，培养一定时间后，根据囊内　呈线性上升趋势，４０　ｍｉｎ之后上升减缓或处于平　台期，与Ｈｕｒｗｉｔｚ等用鸡小肠研究ＶＤ　对钙吸收　收稿日期：２００８—１０—１４　基金项目：湖南省自然科学基金（０８ＪＪ３０８４）：国家“十一五”科　的影响时，肠囊培养９０　ｍｉｎ相差较大　细胞活性　技支撑项目（２００６ＢＡＤ１２Ｂ０２＿５—１）　评价可用台盼蓝拒染试验和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）比　作者简介：徐运杰（１９８Ｏ一），男，在读硕士研究生，主要研究　色法等方法来检测。乳酸与氧化型辅酶Ｉ（ＮＡＤ）　方向为饲料养分生物学效价评定　在ＬＤＨ催化作用下生成丙酮酸和还原型辅酶Ｉ　通讯作者：方热军（１９６２一），男，教授，博士生导师，主要研　（ＮＡＤＨ），丙酮酸再与２，４一二硝基苯肼作用生成　究方向为矿物质营养，Ｅ—ｍａｉｌ：ｆａｎｇｒｉ６３＠１２６．ｃｏｎ。　２，４一二硝基苯腙，后者在碱性介质中显棕红色，　＋··—－｝一一＋“＋－·＋··＋－＋＊＋··＋”＋”＋－＋－＋一＋一＋－　＋一－＋ｎ—－－　“　一一—＋一一—＋．　１９９５：８．　２２—２３．　［５］甘孟侯．巾国禽病学［Ｍ］．北京：中国农业出版礼，　［８］　徐海花，张万福．非典型新城疫发生原因及防制措施　１９９９：７．　（Ｊ］．上海畜牧兽医通讯，２０００（２）：１１—１３．　［６］朱模忠．兽药手册［Ｍ　Ｊ．北京：化学工业出版社，２００２：７．　［９］　王可．鸡非典型性新城疫的诊治（Ｊ］．动物保健，２００３　［７］杨汉春．鸡新城疫的综合防治［Ｊ］．中国家禽，２００５（１）　（７）：１９—２２．