RP—HPLC法测定肤痒胶囊中腺苷的含量

维普资讯 http://www.cqvip.com 第３０卷第４期　浙江师范大学学报（自然科学版）　Ｖ０１．３０．Ｎｏ．４　２００７年１１月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．）　ＮＯＶ．２Ｏ０７　文章编号：１００１－５０５１（２００７）０４－０４３２－０３　ＲＰ．ＨＰＬＣ法测定肤痒胶囊中腺苷的含量　李晓东　，　胡芳弟　，　李　芸　，　马　丹　，　李　冰　，　封士兰　（１．兰州大学药学院，甘肃兰州７３００００；２．甘肃中医学院，甘肃兰州７３００００）　摘要：采用反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）法，Ｋｒｏｍａｓｉｌ　ＯＤＳ一１柱，乙腈－水为流动相，流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，柱温　２５℃，检测波长２６０　ｎｍ，建立了肤痒胶囊中腺苷的含量测定方法．结果显示，腺苷的检测线性范围是０．０２１—　０．５２５　ｍｇ／ｍＬ，回归方程为Ａ＝３３１．９×１０　Ｐ＋２．７８×１０　，相关系数ｒ为０．９９９　５，回收率为９９．５５％，相对标准　偏差为０．６４％．因此，用ＨＰＬＣ法测定腺苷的含量，简便、快速、准确、可靠，可用于肤痒胶囊的质量控制．　关键词：肤痒胶囊；高效液相色谱；二极管阵列检测器；腺苷；含量测定　中图分类号：Ｒ９２７．２　文献标识码：Ａ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ｉｎ　Ｆｕｙａｎｇ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｂｙ　ＲＩＰ－ＨＰＬＣ　ＬＩ　Ｘｉａｏｄｏｎｇ　，ＨＵ　Ｆａｎｇｄｉ　，ＬＩ　Ｙｕｎ　，ＭＡ　Ｄａｎ。，ＬＩ　Ｂｉｎｇ。，ＦＥＮＧ　Ｓｈｉｌａｎ。　（１．＆＾ｏ０ｆ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｇ。Ⅲ“７３００００。Ｃｈｉｎａ；２．Ｇａｎｓｕ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｅｎ，　，　“Ｇａｎｓｕ　７３００００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ・－ｐｈａｓｅ　ｈｉｇｈ・－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｇｈｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ　ａｒｒａｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，Ｋｒｏｍａｓｉｌ　ＯＤＳ・１　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—　ｗａｔｅｒ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，ｆｌｏｗ　ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｗａｓ　１．０　ｍＬ・ｍｉｎ～，ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ａｔ　２５℃ａｎｄ　ｄｅｔｅｃ—　ｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　２６０　ｎｍ　ｏｆｒ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｆｕｙａｎｇ　ｃａｐ－　ｓｕｌｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｈａｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　０．０２１～０．５２５　ｍｇ・　ｍＬ　ｆ０ｒ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｗａｓ　Ａ＝３３１．９　Ｘ　１０　Ｐ＋２．７８　Ｘ　１０　ｗｉｔｈ　ａ　ｃｏｅｍｃｉｅｎｔ　０．９９９　５，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．５５％ｗｉｔｈ　ＲＳＤ　ｏｆ　０．６４％．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ。ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｃｏｎｖｅｎ—　ｉｅｎｔ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｔｏ　ｏｐｅｒａｔｅ　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｆｕｙａｎｇ　ｃａｐｓｕｌｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｆｕｙａｎｇ　ｃａｐｓｕｌｅ；ＲＰ・ＨＰＬＣ；ＰＤＡＤ；ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　肤痒胶囊是由地肤子、苍耳子、川１芎、红花和　块、跌扑损伤、疮疡肿痛，是传统的活血化瘀中药，　白英５味药材制成的中药胶囊制剂，具有祛风活　应用范围非常广泛…．腺苷是红花防治心脑血管　血、除湿止痒的功效，用于皮肤瘙痒症、湿症、荨麻　疾病的主要活性部位或成分　Ｊ．有文献报道　，　症等瘙痒性皮肤症的治疗．红花在该制剂中含量　用高效液相色谱法测定肤痒颗粒中阿魏酸和齐墩　比较大．红花为菊科植物Ｃａｒｔｈａｍｕｓ　ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ　Ｌ．　果酸的含量，可用于控制川芎和地肤子的质量；而　的干燥花，辛、温，归心、肝经，具有活血通经、散瘀　对红花，仅采用薄层色谱（ＴＬＣ）法进行定性鉴别，　止痛的功效，用于经闭、痛经、恶露不行、瘢瘕痞　未见其含量测定的报道．笔者采用反相高效液相　收文日期：２００７－０７－２０；修订日期：２００７－０９—１２　作者简介：李晓东（１９７９一），男，甘肃通渭人，硕士研究生．研究方向：中草药中药制剂化学成分分离分析　通讯作者：封士兰　维普资讯 http://www.cqvip.com 第４期　李晓东，等：ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定肤痒胶囊中腺苷的含量　４３３　色谱（ＲＰ—ＨＰＬＣ）法测定了红花中主要成分腺苷　的含量，为中药制剂肤痒胶囊提供一个质量控制　方法．　１材料与方法　１．１仪器与试剂　Ｗａｔｅｒｓ　６００Ｅ高效液相色谱仪系列：在线脱气　机，四元泵，Ｍｉｌｌｅｎｎｕｍ３２工作站，２７７１自动进样　器，柱温箱，二极管阵列检测器（２９９６），　ＫＱ３２００ＤＢ超声波清洗器（昆山市超声仪器有限　公司）；Ｋｒｏｍａｓｉｌ　ＯＤＳ．１柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　Ｉｘｍ）（天津市琛航科技仪器有限公司）．腺苷对照　品（购自中国药品生物制品鉴定所，供含量测定　用，批号：８７９－２００００１）；肤痒胶囊（兰州和盛堂药　业有限公司提供）；乙腈为色谱纯（山东禹王实业　有限公司禹城化工厂）；水为自制三蒸水（爱科实　验室超纯水机系列产品，ＵＰ取水，台湾振大水处　理器材（太仓）有限公司）；其他试剂均为分析纯．　１．２色谱条件　流动相：乙腈．水（体积比４：９６），流速１．０　ｍｌＭｍｉｎ，柱温２５℃，检测波长２６０　ｎｍ．　１．３溶液的制备　１．３．１供试品溶液的制备　取样品粉末约２．５　ｇ，精密称定，置１００　ｍＬ具　塞三角瓶中，加甲醇２０　ｍＬ，超声提取３次，每次　２０　ｍｉｎ，过滤；合并滤液，浓缩，用甲醇溶解，定容　至５　ｍＬ，用０．４５　ｍ滤膜过滤，作为供试品溶液．　１．３．２对照品溶液的制备　精密称取腺苷对照品适量，加甲醇制成１　ｍＬ　含０．５２５　ｍｇ腺苷的对照品溶液，即得．　１．３．３　阴性对照品溶液的制备　按处方量称取处方中除红花外的其余４味中　药，并按制法制成腺苷阴性对照品，取阴性对照品　依供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液．　２结果　２．１系统适应性试验　取上述对照品溶液、阴性对照品溶液及供试　品溶液，在上述色谱条件下，各进样１０　，测得　ＨＰＬＣ图谱（见图１），表明阴性对照品在与对照　品的色谱相同位置处无干扰．理论塔板数按腺苷　计算不低于３　０００．　２．２线性关系考察　分别精密吸取腺苷贮备液０．２、１．０、２．０、　３．０、４．０　ｍＬ，加甲醇分别定容至５　ｍＬ，连同贮备　（ａ）供试品　（ｂ）腺苷对照品　（ｃ）阴性对照品　图１　ＲＰ—ＨＰＬＣ谱图　液得６个不同浓度的对照品溶液，按上述色谱条　件，进样１０　检测，重复３次，以峰面积　为纵　坐标、质量浓度Ｐ（单位：ｍｅ／ｍＬ）为横坐标绘制工　作曲线，回归方程为：Ａ＝３３１．９×１０　Ｐ＋　２．７８×１０　，相关系数ｒ＝０．９９９　５．测定结果（见　表１）表明腺苷含量在０．０２１～０．５２５　ｍｅ／ｍＬ时具　有良好的线性关系．　表１　ＲＰ－ＨＰＬＣ法检测腺苷的线性关系测定结果　Ｐ（腺苷）／（ｍｇ・ｍＬ　）　峰面积　０．０２１　７ｌ７　３３０　０．１０５　４　０７５　３２５　０．２１Ｏ　８　５ｌ２　３０３　０．３１５　ｌ１　８ｌｌ　５９９　０．４２０　１４　５８ｌ　４０８　０．５２５　１７　６６２　２９５　维普资讯 http://www.cqvip.com ４３４　浙江师范大学学报（自然科学版）　２００７年　２．３精密度试验　和０．３８０　８　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．１％（ｎ＝５），表明重现　取供试品溶液，重复进样４次，每次１０　Ｌ，　性较好．　测得峰面积并计算出相对标准偏差（ＲＳＤ）为　表３　ＲＰ—ＨＰＩ　Ｃ法检测腺苷的稳定性试验结果　０．６３％（见表２）．　表２　ＲＰ—ＨＰＬＣ法检测腺苷的精密度试验结果　２．６回收率试验　采用加样回收法．精密称取适量的已知含量　２．４稳定性试验　的肤痒胶囊粉末６份，分别加入高、中、低不同量　取供试品溶液，在０、１、２、３　ｄ分别进样１０　的对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制得样　，记录峰面积并计算出ＲＳＤ为４．６４％（见　品溶液，各取１０　Ｌ进样检测，计算回收率，结果　表３）．可见，供试品溶液在３　ｄ内稳定．　见表４．　２．５重现性试验　２．７样品的测定　取样品５份，按供试品溶液制备法制得５份　取１、２、３号供试品，依上述方法分别制成供　供试品溶液，按样品测定法测定，测得供试品中腺　试品溶液，各吸取１０　Ｌ进样，在上述色谱条件下　苷含量分别为０．３８０　８、０．３８１　２、０．３８０　１、０．３８０　７　测定，计算样品中腺苷的含量，结果见表５　表４　ＲＰ—ＨＰＬＣ法检测腺苷的回收率试验结果　表５　ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定样品中腺苷含量的结果　在线过滤器；最终选用乙腈一水（体积比４：９６）作　为流动相，峰形好，杂质峰没有干扰．　（２）文献［１，６］报道腺苷的含量测定用水一醋　酸一乙腈作流动相，但含酸的流动相对色谱柱的使　用寿命有影响．本实验所用的流动相不含酸，既可　３讨论　保护色谱柱，又简单易行．　（３）腺苷含量的测定有多种方法，笔者建立　（１）笔者曾选用了不同的流动相，如以０．１％　的反相高效液相色谱法测定肤痒胶囊中腺苷含量　磷酸一乙腈（体积比９０：１０）作为流动相，结果显　的方法，具有样品预处理简单、方法回收率高、重　示腺苷峰形不好；改用０．５％磷酸一乙腈（体积比　现性好、稳定等特点，可以作为肤痒胶囊的质量控　９０：１０），峰形有所改善，但容易堵塞液相色谱的　制方法．　参考文献：　［１］刘超，陈蕴，马玉华，等．不同来源红花的质量研究　］．河南中医学院学报，２００６，２１（１２２）：３３．３４．　［２］Ｋｕｔｓｕｎａ　Ｈ，Ｆｕｊｉｉ　Ｓ，Ｋｉｔａｍｕｒａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｆｒｏｍ　Ｓａｆｌｆｏｗｅｒ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ　ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ　Ｌ．）　［Ｊ］．Ｙａｋｕｇａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ，１９８８，１０８（１１）：１１０１・１１０４．　［３］刘小花，封士兰，李芸，等．ＨＰＬＣ测定肤痒颗粒中齐墩果酸的含量［Ｊ］．中成药，２００７，２９（２）：３０１．３０２．　［４］胡波，熊文碧，熊心勇．肤痒颗粒的鉴别和含量测定［Ｊ］．华西药学杂志，２００７，２２（１）：１０２．１０３．　［５］宗呜，王凯乾，王建明．肤痒茶剂质量标准的研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２００６，１２（１）：１５．１７．　［６］郭美丽，付立波，张芝玉，等．ｕＶ，ＨＰＬＣ测定红花中黄色素、多糖和腺苷的含量［Ｊ］．中国药学杂志，１９９９，３４（８）：５５０－５５２．　（责任编辑薛荣）